以PCR為代表的核酸擴(kuò)增技術(shù)自1988年發(fā)明以來，已廣泛應(yīng)用于科研和臨床，但用于生物制藥則較晚，這是因為標(biāo)準(zhǔn)化的建立需要一定的時間。

國外已有不少藥廠將PCR或qPCR用于工業(yè)放行檢測中的支原體檢查。PCR的靈敏度、特異性、適用性和可靠性具有達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)的潛在可能。但需要按步驟和程序開展方法驗證。

有作者指出，有些PCR法在反應(yīng)條件及引物設(shè)計上，仍需不斷改良以提高其檢測效率。作者曾用半巢式PCR檢測70份支原體污染的樣本（主要為生物制品生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)），結(jié)果只檢出60份，說明PCR要應(yīng)用于工業(yè)檢測支原體，其首要因素是要提高檢測限。見2015年《生物制品學(xué)雜志》中的《中國生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)污染支原體類型的分析及豬鼻支原體特異性檢測方法的初步建立》。

需要指出的是，對于工業(yè)藥廠，如要采用PCR方法進(jìn)行支原體污染的檢查，如方法需要驗證，可使用minerva biolabs提供的現(xiàn)成的支原體標(biāo)準(zhǔn)品。如簡化驗證，可使用現(xiàn)成的已經(jīng)過驗證的支原體PCR或qPCR檢測試劑盒。并且支原體DNA需要經(jīng)過抽提才能進(jìn)行檢測，以保證相應(yīng)的靈敏度。

下面小編介紹一下商業(yè)試劑盒的特點(diǎn)：

1）使用靈活

    *  與幾乎所有商用循環(huán)儀兼容

    *  可選擇常規(guī)PCR或?qū)崟r熒光定量PCR

2）高性能

    *  高耐用性、高靈敏度和高特異性（>100種支原體物種可檢測）

    *  符合EP 2.6.7 / USP <71> / JP G3標(biāo)準(zhǔn)。提供內(nèi)部擴(kuò)增對照，

          用于過程監(jiān)測。有產(chǎn)品驗證報告

3）使用方便

   *  預(yù)先分裝PCR mix（25個反應(yīng)），保證長期穩(wěn)定性

   *  組分為凍干粉形式，使運(yùn)輸與存儲更簡單

   *  探針檢測，結(jié)果清晰（qPCR）

可考慮的標(biāo)準(zhǔn)品需要經(jīng)過嚴(yán)格標(biāo)定。需考慮有聲譽(yù)和質(zhì)控報告的標(biāo)準(zhǔn)品廠家。下面介紹某廠家標(biāo)準(zhǔn)品類別如下：

配套用于過程驗證和檢測的標(biāo)準(zhǔn)品（EP2.6.7/USP<71>/JP G3）：

*  10CFU™靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品，包括所有EP和JP列舉的支原體物種

*  100CFU™靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品

*  支原體和細(xì)菌基因組DNA（特異性驗證用）

*  PCR定量標(biāo)準(zhǔn)品（10⁸拷貝DNA/管）

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